DNA快速連接試劑盒

DNA快速連接試劑盒

DNA連接反應通過T4連接酶催化雙鏈DNA的3'-OH和5'-P形成磷酸二酯鍵而將DNA共價連接在一起。被連接的DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoRI產生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I產生的末端）。Pheiffer 等人發現PEG可以促進T4 DNA連接酶催化的連接反應[NAR，11，7853-7871，1983]，連接反應只需十分鐘即可完成。本產品就是根據這一原理設計，其特點如下：

1. 超快，整個連接反應只需要室溫5分鐘左右，反應液可以直接用于轉化實驗。

2. 高效，溶液配方經過優化，每μg插入DNA連接轉化得到的重組子可達107左右。

3. 既可用于平末端連接，也可用于粘末端連接，包括PCR產物與T載體的連接。

4. 簡單，客戶只需要提供載體和插入片段即可。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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