細胞核微量制備試劑盒

細胞核微量制備試劑盒

用高密度介質來分離動物軟體組織（如肝臟、脾臟等）細胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年發明，其原理是細胞核的密度較大，在高速離心條件下可在高密度介質中沉降下來，從而達到與細胞質其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細胞核，得到廣泛應用。本產品就是在Chauveau方法的基礎上優化改進而來，它具有下列特點：
1. 基于密度梯度分離，可有效去除細胞質及其他細胞器，得到的細胞核純凈。 
2. 加入了可以改變分離介質滲透壓的物質，減少了細胞核的脆性，增加了細胞核的完整性。
3. 精心調節了介質的pH，防止細胞核在分離過程中的聚集，還能保持細胞核的精細結構。
4. 快速，整個操作過程僅需1小時即可完成（對一個樣品而言）。
5. 提供染色試劑，可以在普通光學顯微鏡下檢測純化的細胞核的純度。
6. 處理溫和，得到的細胞核中的大部分蛋白質都具有活性，可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究；也可用于超大片段DNA的純化。
7. 不但適用于動物和植物培養細胞，還能用于實體組織（能用Dounce或Potter勻漿器勻漿的組織均可）。
8. 一次微量提取足夠處理0.1 g組織或5×107個培養細胞，本產品足夠50次細胞核微量提取。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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