DNA嵌套缺失試劑盒

DNA嵌套缺失試劑盒

常見的DNA嵌套缺失（Nested Deletion）方法是利用ExoⅢ等外切酶從線狀DNA的一端連續切除核酸，后環化得到可以轉化的質粒。該方法早由Henikoff在Putney的方法的基礎上發明，本產品是在Henikoff方法的基礎上改良而得，它具有下列特點：
1. 不需要使用超螺旋的質粒和任何限制性內切酶，非常皮實。
2. 一站式，用戶只需要提供質粒，不需要單獨準備其他試劑。
3. 一管式，不需要任何純化和回收的處理。
4. 提供陽性對照質粒，便于在遇到困難時分析原因。
5. 得到的片段可以用于側序和蛋白結合位點的分析等試驗。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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