DOP-PCR試劑盒

DOP-PCR試劑盒

DOP-PCR即Degenerated Oligonucleotide Primed PCR（簡并寡核苷酸引物聚合酶鏈反應），它與普通PCR的區別在于其使用單一的半簡并引物和低復性溫度，半簡并引物由特定序列+簡并序列+特定序列三部分組成，因此沒有種屬特異性，也跟DNA的復雜性無關，能均勻地擴增真個基因組，尤其適用于痕量DNA樣品的擴增。本產品是在經典DOP-PCR基礎上經過精心優化而來，產品具有下列特點：
1. 改進了DOP-PCR的循環參數。
2. 優化的引物濃度，使自連序列和非模板相關序列的合成。 
3. 可使用各種來源的樣品，包括全血，干血，發根，口腔粘膜刮液培養細胞，真菌和病毒等。
4. 操作簡便快捷，恒溫（30℃）反應，無須PCR儀即可實現擴增。 
5. 產物可用于多種后續試驗，包括多重PCR、長片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫構建、單倍型分析、測序、基因芯片分析、各種遺傳分析（片段差異，微衛星差異，SNP，STR）等。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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